孙世晓 杨添淞 曲丽 姜海英 贾明明
(黑龙江中医药大学生理教研室，黑龙江 哈尔滨150040)
摘要 目的：观察高频、中频、低频电针内关穴对PPI诱导急性心肌缺血模型家兔的保护作用，为针灸临床治疗心血管疾病提供实验依据。方法：选择健康成年家兔随机分为正常组、模型组、假针刺组、高、中、低频电针组，电针选择内关穴，造模用耳缘静脉注射并持续滴注PPI方法复制急性心肌缺血家兔模型，BL-420F生物机能实验系统记录Ⅱ导联心电图，722分光光度计测定血清LDH、CK、CK-MB、SOD、MDA，同时用电子天平检测心肌组织含水量。结果：模型组家兔给予PPI后，心电图很快出现对称性直立高耸T波，心率减慢，360min时血清检测LDH、CK、CK-MB明显升高以及MDA增加、SOD降低，心肌组织含水量明显增加;假针刺组与模型组比较，以上指标无明显变化;高频、中频电针组与模型组比较，以上指标有显著改善，低频电针组以上指标无明显变化。结论：高、中频电针对PPI诱导家兔急性心肌缺血有明显保护作用，该作用与电针增强内源性OFR清除系统功能有关。
关键词：心肌缺血 动物模型 电针 内关穴
Protective Effect of Different Frequency Electroacupuncture on Heart of PPI-induced AMI in Rabbits
Sun Shixiao,Yang Tiansong,Qu Li,Jiang Haiying,Jia Mingming
(Dept. Physiology，Hei Longjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China)
Abstract: -ive To observe the protective effect of high-, mid- and low-frequency electroacupuncture in Neiguan on heart function of PPI(Posterior Pituitary injection) induced AMI (acute myocardial ischemia) rabbit, and provide experimental evidence for treatment of cardiovascular diseases with acupuncture.
Method We divided healthy adult rabbits into normal group, model group, sham acupuncture group, high-, mid- and low-frequency electroacupuncture groups. Neiguan was selected to administer electroacupuncture. AMI model was established by a single injection and continuous infusion of PPI from the (marginal) ear vein. Ⅱ lead-ECG was recorded by BL-420F. LDH, CK, CK-MB, SOD and MDA in serum were assessed by 722 spectrophotometer, and water content of myocardial tissue was detected by electronic balance.
Results After administered with PPI, ECG showed symmetry vertical towering T wave and the slowed HR. At the time point 360min after injected PPI, the content of LDH, CK, CK-MB, MDA in serum increased obviously, while SOD decreased significantly. Meanwhile, the water content of myocardial tissue rose obviously. Compared with the model group, no significant changes were observed in sham acupuncture group. Compared with the model group, high- and mid-frequency electroacupuncture improved the above indexes obviously, while low-frequency electroacupuncture didn’t have significant action.
Conclusion High- and mid-frequency electroacupuncture take obvious protective effect on AMI rabbits induced by PPI, which is associated with the strength of electroacupuncture on endogenous OFR clearance system.
Key words: myocardial ischemia, animal models, electroacupuncture, Neiguan
前言 资料表明[1、2、3]，针刺对心肌缺血有一定治疗作用，但不同频率电针对心肌缺血作用的对比研究报道较少。基于此，我们以耳缘静脉注射并持续滴注PPI方法制造家兔急性心肌缺血动物模型，以心电图、血流动力学、血清心肌酶、SOD、MDA以及心肌组织含水量为观察指标，对比观察高频、中频、低频电针内关穴对PPI诱导急性心肌缺血家兔模型的影响，为针灸临床治疗心血管疾病提供实验依据。
1 材料和方法
1.1材料 1.11实验动物：健康成年家兔，雌雄各半，体重1.5～2.5kg，黑龙江中医药大学实验动物中心提供。1.12实验仪器：KDW808Ⅱ型全能脉冲电疗仪，汕头市医用设备厂有限公司生产;BL-420F生物机能实验系统，成都泰盟科技有限公司生产;722型可见分光光度计，上海第三分析仪器厂生产;电热鼓风干燥箱，上海福玛试验设备有限公司生产;PL202-S电子天平，日本生产。1.13实验药品：垂体后叶注射液(Posterior Pituitary injection，PPI)，批号：080905，上海第一生化药业有限公司生产。1.14实验试剂：乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒，批号：20090423;肌酸激酶(CK)试剂盒，批号：20090622;肌酸激酶同功酶(CK-MB)试剂盒，批号：20090388;超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒，批号：20090432;丙二醛(MDA)测定试剂盒，批号：20090628;以上试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。
1.2方法 将家兔60只随机分为正常组、模型组、假针刺组、高、中、低频电针组，每组10只。模型组家兔不给电针刺激，仅用针形电极插入家兔四肢皮下记录Ⅱ导联心电图，记录参数为：放大器范围1mV，时间常数0.1s，滤波100Hz，扫描速度125ms/div，待曲线稳定后，立即耳缘静脉快速注射(30s内注完)PPI 3U/kg，之后继续给予静脉持续滴注(PPI 25U加入0.9%的生理盐水250ml中)1小时，滴注速度为20～30滴/min，复制急性心肌缺血家兔模型，从注药开始即连续记录心电曲线，然后分析第10s、1min、5min、10min、30min、60min时间点心率(HR)及T波波幅变化，到360min时，手术分离左侧颈总动脉取血2ml，4℃离心分离血清，检测血清中LDH、CK、CK-MB、SOD、MDA变化，取血后立即剪开家兔胸腔取出心脏，用冰盐水清洗并剔除大血管及结缔组织，检测心肌组织含水量变化。高、中、低频电针组分别给予家兔连续7天电针刺激，穴位选双侧内关穴，每日上午8点至10点之间电针一次，每次电针40min，用华佗牌0.19mm×10mm毫针，家兔内关穴取穴方法参照《实验针灸学》动物标准穴位图谱，无关电极在掌心，连接G6805-Ⅱ电针仪，电针参数为：低频组2Hz、中频组50Hz、高频组100Hz，各组电压均为3V，连续波。在第7天电针之前，首先记录家兔心电图，待曲线稳定后给予电针40min，然后造模，观察方法同模型组。假针刺组家兔不给电针刺激，仅在相应时间点给予40min捆绑，其余造模及观察方法同模型组。正常组家兔不造模，也不给电针刺激，仅在相应时间点进行指标观察作正常对照。
实验数据以均值±标准差表示，统计分析采用SPSS11.5软件做t检验。
2 结果 不同频率电针内关穴对PPI诱导急性心肌缺血模型家兔HR、T波波幅、LDH、CK、CK-MB、SOD、MDA和心肌组织含水量的影响，结果分别见表1、表2、表3。
表1：电针内关穴对PPI诱导急性心肌缺血家兔HR（次/min）的影响（，n﹦10）
组别
10sce
1min
5min
10min
30min
60min
正常组
290.06±18.14
298.92±42.10
308.29±33.66
296.29±30.44
309.88±24.25
298.22±31.18
模型组
250.14±37.32*
234.29±40.08*
216.00±40.15#
220.14±40.48#
211.43±22.83#
209.71±20.96#
假针组
265.48±21.38*
239.66±34.10*
211.06±23.10#
218.09±36.42#
208.43±38.17#
215.18±37.69#
高频组
258.52±44.02*
265.31±11.05*△
269.33±25.28*△
273.23±28.19*△
265.68±35.30*△
266.01±22.06*△
中频组
249.39±26.14*
259.79±20.08*△
276.58±35.15*△
269.96±33.72*△
277.03±20.53*△
270.66±19.44*△
低频组
253.29±38.90*
240.36±25.10*
221.45±48.16#
221.33±22.36#
217.12±32.15#
219.71±40.07#
注：与正常组比较：*P＜0.05；与正常组比较：# P＜0.01；与模型组比较△P＜0.05。
由表1可见，模型组10s、1min时间点的HR与正常组比较，P＜0.05，说明有显著性差异；模型组5min、10min、30min、60min时间点的 HR与正常组比较，P＜0.01，说明有非常显著性差异。假针刺组各时间点HR与模型组比较，P＞0.05，说明无显著性差异。高频电针组、中频电针组1min、5min、10min、30min、60min时间点的HR与模型组比较，P＜0.05说明有显著性差异；低频电针组各时间点的HR与模型组比较，P＞0.05说明无显著性差异。
表2：电针内关穴对PPI诱导急性心肌缺血家兔T波波幅（mV）的影响（，n﹦10）
组别
10sce
1min
5min
10min
30min
60min
正常组
0.19±0.06
0.18±0.05
0.19±0.06
0.18±0.07
0.18±0.08
0.18±0.05
模型组
0.27±0.04*
0.32±0.08*
0.35±0.05*
0.33±0.04*
0.33±0.06*
0.33±0.05*
假针组
0.26±0.05*
0.34±0.06*
0.36±0.03*
0.34±0.05*
0.35±0.08*
0.32±0.04*
高频组
0.23±0.04*
0.30±0.08*
0.24±0.04*△
0.26±0.04*△
0.20±0.05*△
0.20±0.08*△
中频组
0.25±0.09*
0.26±0.07*△
0.26±0.06*△
0.26±0.04*△
0.22±0.06*△
0.23±0.06*△
低频组
0.28±0.05*
0.31±0.07*
0.32±0.06*
0.34±0.08*
0.34±0.06*
0.34±0.08*
注：与正常组比较：*P＜0.05；与模型组比较△P＜0.05。
由表2可见，模型组10s、1min、5min、10min、30min、60min各时间点T波波幅与正常组T波波幅比较，P＜0.05，说明有显著性差异。假针刺组各时间点T波波幅与模型组比较，P＞0.05，说明无显著性差异。高频电针组5min、10min、30min、60min各时间点T波波幅与模型组比较，P＜0.05，说明有显著性差异。中频电针组1min、5min、10min、30min、60min各时间点T波波幅与模型组比较，P＜0.05，说明有显著性差异，低频电针组各时间点T波波幅与模型组比较，P＞0.05，说明无显著性差异。
表3：电针对LDH、CK、CK-MB、SOD、MDA和心肌含水量的影响（，n﹦10）
组别
LDH
（U/L）
CK
（U/L）
CK-MB
（U/L）
SOD
（U/L）
MDA
（nmol/ml）
心肌含水
百分率（%）
正常组
158.00±16.33
629.33±13.99
553.63±26.81
169.28±32.54
2.490±0.119
76.41±0.39
模型组
189.23±10.32*
735.63±21.12*
669.25±13.24*
102.56±29.26*
5.899±0.201*
79.55±0.25*
假针组
186.55±7.32*
746.06±18.58*
671.08±19.10*
111.25±24.07*
5.523±0.136*
79.28±0.38*
高频组
156.18±14.42△
637.75±22.10△
589.39±28.33△
156.87±32.10△
3.021±0.159△
77.02±0.31△
中频组
154.22±10.87△
644.45±19.07△
562.68±15.78△
161.70±32.48△
3.102±0.202△
77.12±0.42△
低频组
185.53±15.60*
739.98±15.54*
647.44±16.65*
119.64±35.02*
5.489±0.148*
79.07±0.30*
注：与正常组比较：*P